番茄原產(chǎn)于南美西部高原，屬喜聞溫蔬菜，對(duì)溫度比較敏感。研究表明，番茄的整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，生殖生長(zhǎng)時(shí)期對(duì)溫度敏感，這主要是因?yàn)榛ǚ郯l(fā)育時(shí)期尤其是減數(shù)分裂和配子形成時(shí)期是植物生殖過(guò)程中高敏感階段，高溫容易造成花粉敗育，從而導(dǎo)致授粉受精不良、座果率下降、畸形果率升高等問(wèn)題。應(yīng)對(duì)全球變暖這一嚴(yán)峻的環(huán)境問(wèn)題，授粉前對(duì)花粉活性進(jìn)行檢測(cè)和篩選，則成為番茄產(chǎn)量和品質(zhì)的重要保障。
本實(shí)驗(yàn)利用Ampha Z32花粉活力分析儀（IFC法）測(cè)試了采自多個(gè)國(guó)家的1000份番茄花粉的活性。圖1為1000份花粉活性的百分比堆積柱狀圖，其中綠色為活性花粉占比，紅色為死亡花粉的占比，紅圈內(nèi)為Ampha Z32花粉活力分析儀測(cè)量得到細(xì)胞散點(diǎn)云圖。如圖所示，圖中左側(cè)樣本的花粉活性幾乎達(dá)到了100%，右側(cè)樣本的花粉活性幾乎為0%，細(xì)胞散點(diǎn)云圖中清晰區(qū)分出活性細(xì)胞類(lèi)群和失活細(xì)胞類(lèi)群。對(duì)于第900-1000個(gè)樣本的花粉活性小于10%，不適用于育種或種子生產(chǎn)，將直接被淘汰。
圖1花粉活性百分比堆積柱狀圖
此外，本實(shí)驗(yàn)還利用體外萌發(fā)法驗(yàn)證了該方法的可靠性，分別采用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽瓊脂培養(yǎng)基和改良的液體發(fā)芽緩沖液進(jìn)行培養(yǎng)。如圖2所示，對(duì)于IFC法測(cè)量的活力大于80%的花粉，使用標(biāo)準(zhǔn)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，花粉的萌發(fā)率小于20%，二者差異顯著；而使用改良后的萌發(fā)緩沖液，花粉的萌發(fā)率明顯增高且與IFC法測(cè)量結(jié)果一致。由此可見(jiàn)，番茄花粉的萌發(fā)受培養(yǎng)基類(lèi)型的影響差異較大，選擇合適的培養(yǎng)基是準(zhǔn)確判斷花粉萌發(fā)率的前提，在合適的培養(yǎng)條件下，IFC法與體外萌發(fā)法一致性極高，是一種可靠、便捷的測(cè)試方法。
圖2. IFC法與體外萌發(fā)法的相關(guān)性分析
標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽瓊脂培養(yǎng)基(■)和改良的液體發(fā)芽緩沖液(●)。藍(lán)色和綠色虛線分別代表相應(yīng)的相關(guān)性方程和相關(guān)系數(shù)，Y誤差線表示萌發(fā)法的標(biāo)準(zhǔn)偏差，X誤差線表示IFC法的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
對(duì)比1000份番茄花粉的活性散點(diǎn)圖（橫坐標(biāo)為相對(duì)活性，縱坐標(biāo)為相對(duì)大小），我們發(fā)現(xiàn)大部分花粉的活性散點(diǎn)圖，失活細(xì)胞相較于活性細(xì)胞可劃分為兩個(gè)部分，一部分細(xì)胞的位置與活性細(xì)胞一致，而另一部分則明顯低于活性細(xì)胞，結(jié)合顯微鏡鏡檢，我們發(fā)現(xiàn)這部分位置靠下的細(xì)胞體積較小且形狀不規(guī)則。由此，我們將花粉細(xì)胞三個(gè)類(lèi)群：成熟的活花粉，成熟的死花粉以及異?；ǚ?，如圖3所示。
圖3. 花粉的活性散點(diǎn)圖中的花粉類(lèi)別
為進(jìn)一步了解異?；ǚ蹖?duì)花粉活性的影響，本實(shí)驗(yàn)研究了1000個(gè)樣本中，異常花粉在失活花粉中的占比以及異?；ǚ墼谡麄€(gè)花粉樣本中的占比。
圖4.異常花粉在死亡花粉中的占比排序圖
圖4為異?；ǚ墼谑Щ罨ǚ壑械恼急扰判驁D，紅色為成熟的死花粉，藍(lán)色為異?；ǚ邸Ｈ鐖D可見(jiàn)，這1000個(gè)樣本基本都含有異常花粉，其中有10%的樣本，異?；ǚ墼谑Щ罨ǚ壑械恼急冗_(dá)到了40%以上。
圖5. 異?；ǚ墼谡麄€(gè)樣本中的占比
圖5為異?；ǚ墼谡麄€(gè)樣本中的占比，從圖中我們可以看出，對(duì)于大多數(shù)樣本來(lái)說(shuō)，異常花粉的占比約為5%，而個(gè)別樣本的異?；ǚ蹍s超過(guò)了50%，甚至達(dá)到了87.3%。顯然，異?；ǚ凼菍?dǎo)致這部分樣本花粉活力降低的主要因素。這些異常花粉主要為花粉發(fā)育的過(guò)程產(chǎn)生空花粉、不育花粉、退化花粉、損傷花粉或畸形花粉，它們體積較小，形狀皺縮不規(guī)則，與花粉發(fā)育過(guò)程中受到的脅迫，尤其是熱脅迫密切相關(guān)，可作為判斷番茄在生長(zhǎng)中是否受到脅迫的指標(biāo)。
最后，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比1000份番茄花粉的活性散點(diǎn)圖，按散點(diǎn)圖類(lèi)型進(jìn)行了分類(lèi)，如圖6，總體可分為四類(lèi)：1）花粉活性較高，且?guī)缀鯖](méi)有異?；ǚ郏?）花粉活性適中，基本沒(méi)有異?；ǚ郏?）花粉活性非常低，基本沒(méi)有異?；ǚ?；4）花粉活性中等，但含有大量的異?；ǚ?。根據(jù)以上結(jié)果，我們可以在今后的番茄生產(chǎn)過(guò)程中，盡可能的篩選活性高且無(wú)異常細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)花粉進(jìn)行授粉；以異?；ǚ鄣恼急茸鳛榉焉L(zhǎng)是否受到脅迫的重要指示，幫助及時(shí)調(diào)整生產(chǎn)環(huán)境；此外，還可以幫助我們進(jìn)行耐熱抗旱品系篩選。
圖6. 不同質(zhì)量的番茄花粉散點(diǎn)圖
本實(shí)驗(yàn)表明Ampha Z32花粉活力分析儀（IFC法）無(wú)需染色等預(yù)處理，能夠快速、高通量、準(zhǔn)確測(cè)量花粉活性，并且可以通過(guò)對(duì)比篩選出優(yōu)質(zhì)花粉，是一種可靠的測(cè)試方法，可為番茄產(chǎn)量和品質(zhì)的重要保障。
本次實(shí)驗(yàn)由瑞士Amphasys公司應(yīng)用科學(xué)家和荷蘭瑞克斯旺種苗集團(tuán)公司（Rijk Zwaan）的育種團(tuán)隊(duì)共同完成。