每種微生物基本都有各自的特異性表面抗原，使用單抗偶聯(lián)各種熒光素可方便檢測各種樣品中的微生物。樣品經(jīng)熒光染色（如SYBR Green I 或其他染色劑染色）后，可用CytosSense 測定微生物含量。(高通量：>200000cell ; 粒徑：0.1-700μm) ，目前可直接檢測大腸桿菌，嗜血桿菌、沙門氏菌、結核桿菌、銅綠假單胞菌、軍團桿菌等。在瑞士，F(xiàn)CM方法被列為標準細菌監(jiān)測方法。
2.1 激光檢測器配置：488nm激光器，綠/黃檢測熒光通道。
2.2 進樣系統(tǒng)設置：使用CytoSense 檢測細菌時我們建議在樣品泵中使用特殊的管道，以盡量減少染色細胞粘附在管道上，對其他操作沒有影響。即更換下圖配件：
A） 實驗室手動染色樣品
如果樣品制備中進行了細胞清洗，則直接上機檢測沒有影響；如果樣品沒有清洗，樣品含有游離染料，則有兩種選擇：
a）“正常使用循環(huán)鞘液”：為防止染料在鞘液中積聚，緩慢增加熒光通道中的背景信號，因此建議定期投加氯?？梢酝ㄟ^安裝加氯泵實現(xiàn)自動化，或者，我們可以安裝一個帶有流動開關的特殊過濾器（下圖），以從鞘液中去除染料。
b） 使用“非循環(huán)鞘液系統(tǒng)”：可將“受污染”的鞘液會立即從儀器中排出，無需再循環(huán)，本方案只需為鞘液提供足夠的清潔水。外置鞘液系統(tǒng)有利于保護管路和內(nèi)置的過濾系統(tǒng)，延長其使用壽命。濁度較高的樣品，藻濃度較高的樣品，也可以使用外置鞘液系統(tǒng)來運行儀器。
外置鞘液系統(tǒng)連接方式如下：（標準CytoSense即可，用戶可方便自行改裝）
非循環(huán)外置鞘液系統(tǒng)
增加配件 “細菌染色模塊”，可以自動調(diào)節(jié)鞘液。同時 “染色模塊”，可以實現(xiàn)自動染色。適用于水中微生物我的在線自動監(jiān)測。
使用方法：與正常細胞檢測一樣，沖洗、啟動和分析操作是自動化的，所有程序都在軟件中編寫。熒光染料有時需要在瓶子空了之后重新填充，定期更換氯和過濾器-取決于使用情況等，可自動運行幾個月。
※ 對于已經(jīng)擁有CytoSense的最終用戶，不需要購買另一臺CytoSense，只需加配染色模塊，對現(xiàn)有CytoSense做微小調(diào)整，以適應與染色模塊的耦合（如電子連接和安裝不同類型的樣品泵）。
3.1 上升流系統(tǒng)和人為活動對巴西沿海地區(qū)微生物多樣性的影響(巴西里約熱內(nèi)盧聯(lián)邦大學)
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利采用CytoSense對沖擊式氣體采樣器收集到的氣載細菌和參考菌株大腸桿菌進行計數(shù)和鑒定。配置488nm激光器，550nm的高靈敏度黃光發(fā)射傳感器。同時記錄每個粒子的脈沖形狀的信號可用于估計細胞體積，并將細胞定義為不同細胞類型的特定簇。分析粒子體積通過FWS的掃描脈沖圖或SWS的掃描脈沖圖估算。 |
自動染色模塊（SM）安裝于CytoSense，可同時原位自動采樣、分析浮游植物和細菌。水樣在行船過程中持續(xù)泵入系統(tǒng)，SYBR Green I熒光染料通過小的染色容器逐滴加入樣品（V/V=1：10000），經(jīng)15min 染色反應后自動泵入CytoSense。通過本次項目地中海海洋研究所展示了CytoSense 不僅可以檢測自發(fā)熒光的浮游植物，而且可檢測細菌、鞭毛蟲、纖毛蟲等微生物。經(jīng)過2 小時一次共七天的實驗，獲得了更多有效數(shù)據(jù)。
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