流式細(xì)胞儀能否辨別到種是一些藻類(lèi)檢測(cè)工作者最關(guān)心的問(wèn)題之一。而成像質(zhì)量的提高，可幫助我們觀測(cè)到鑒定相關(guān)的細(xì)節(jié)和高清晰度的內(nèi)部小結(jié)構(gòu)。
理論上，放大倍數(shù)越高，成像質(zhì)量越好，如40X或60X。 然而缺點(diǎn)是倍率越高景深越小，因此一些成像倍率高的設(shè)備通常采用非常窄的流動(dòng)池，也就意味著你只能分析非常小的顆粒，因此，野外樣品（如自然海水等）需要將所有大粒徑的顆粒過(guò)濾掉。CytoBuoy經(jīng)過(guò)不懈努力，更新光學(xué)元件，實(shí)現(xiàn)在16X放大倍數(shù)下使用非常大的流動(dòng)池呈現(xiàn)高質(zhì)量的圖像。新系統(tǒng)可設(shè)置僅在顆粒穿過(guò)相機(jī)焦平面時(shí)進(jìn)行拍攝，這意味著不再有模糊照片形成的照片流阻礙。
關(guān)于CytoSense當(dāng)前使用的超大流通池和放大倍數(shù)，CytoBuoy 公司CEO George B.J. Dubelaar 先生給了比較詳細(xì)的介紹：
樣品的過(guò)濾預(yù)處理
為防止流式細(xì)胞儀管路堵塞，大部分流式細(xì)胞儀都會(huì)標(biāo)明客戶在分析樣品之前需要對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾預(yù)處理。而我們使用的濾膜過(guò)濾孔徑與實(shí)際通過(guò)的顆粒粒徑并非完全一致。實(shí)際上，如果你使用過(guò)濾孔徑為Xμm 的濾篩過(guò)濾樣品，一般來(lái)說(shuō)自由通過(guò)的顆粒粒徑只有X的1/3。粒徑大于1/3Xμm 的顆粒會(huì)隨著過(guò)濾時(shí)間的增長(zhǎng)越來(lái)越難自由通過(guò)濾篩。因此，通過(guò)的顆粒數(shù)量偏低且對(duì)濃度的評(píng)估不準(zhǔn)確，因?yàn)榻咏黊μm大小的顆粒幾乎沒(méi)有通過(guò)。所以，使用非常粗略的方法可以推測(cè)，在儀器入口前對(duì)任何顆粒使用Xμm孔徑的篩網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，所得最大顆粒粒度的正確測(cè)定值僅為X的一半。假如設(shè)備要求樣品分析前必須經(jīng)過(guò)70μm 網(wǎng)篩過(guò)濾，這可能意味著其最佳分析粒徑為30-40μm。對(duì)于CytoSense, 我們建議采用1mm甚或1.2mm濾膜過(guò)濾以防堵塞。
圖像清晰度的關(guān)鍵還取決于光學(xué)透鏡的設(shè)計(jì)
我們通常認(rèn)為成像質(zhì)量依賴于透鏡的放大倍數(shù)。有些成像流式細(xì)胞儀只有在40X和60X放大倍率下才能獲得好的照片，這種倍率下景深極窄和畫(huà)框尺寸非常小。對(duì)與野外樣品就會(huì)存在粒徑限制——最大照片畫(huà)框尺寸的20X倍率也只能分析120μm。CytoSense 具有16X 放大倍數(shù)，然而我們最新透鏡（專門(mén)為我們流式細(xì)胞儀定制設(shè)計(jì)）的光學(xué)設(shè)計(jì)非常優(yōu)秀，而且事實(shí)上聚焦的圖像的清晰度比我們的其他同類(lèi)產(chǎn)品的20X放大倍率還要好。更重要的是，我們可以對(duì)所有大到直徑500um的顆粒進(jìn)行高質(zhì)量成像。
分享一組測(cè)試照片，感受一下新版CytoSense實(shí)際的成像效果。結(jié)合散點(diǎn)圖，Silico-imaging詳細(xì)記錄細(xì)胞的全部光學(xué)信息，逐個(gè)掃描，不放過(guò)自然水體中的稀有藻種。
| 空星藻（Coelastrum.） |  |
| 小環(huán)藻（Cyclotella sp.） |  |
| 小環(huán)藻（Cyclotella sp.） |  |
| 小環(huán)藻（Cyclotella sp.） |  |
| 直鏈藻（Melosira） |  |
| 顆粒直鏈藻極狹變種（Melosira granulata var angustissima） |  |
| 角甲藻（Ceratium） |  |
| 魚(yú)磷藻（Mallomonas） |  |
| 根管藻（Rhizosolenia） |  |
| 等片藻Diatoma |  |
| 嚙蝕隱藻Cryptomons erosa |  |
| 浮游動(dòng)物 |  |